實時定量PCR儀(Real-Time?。眩酰幔睿簦椋簦幔簦椋觯濉。校茫摇。桑睿螅簦颍酰恚澹睿簦┦?**種用于實時監(jiān)測PCR反應過程中擴增產物的儀器。它通過檢測熒光信號的變化來定量分析PCR反應的產物,廣泛應用于基因表達分析、微生物檢測、病毒檢測、DNA定量等領域。
工作原理
實時定量PCR儀的工作原理基于聚合酶鏈式反應(PCR),這是***種用于放大擴增特定DNA片段的分子生物學技術。實時定量PCR儀在傳統(tǒng)PCR的基礎上加入了熒光標記,通過熒光信號的積累實時監(jiān)測整個PCR進程。具體步驟如下:
高溫變性:雙鏈DNA在高溫下變性為單鏈。
低溫退火:引物與單鏈DNA退火,形成雙鏈結構。
適溫延伸:DNA聚合酶在適溫下合成新的DNA鏈。
熒光信號檢測:在每個循環(huán)中,熒光標記的探針或染料與擴增產物結合,產生熒光信號。儀器實時檢測這些熒光信號,并記錄下來。
優(yōu)勢
高靈敏度:能夠檢測極微量的目標DNA。
高特異性:通過熒光標記的探針或染料,確保檢測的特異性。
高分辨率:能夠區(qū)分不同濃度的DNA樣本。
實時監(jiān)測:在PCR反應進行的同時實時檢測熒光信號,減少PCR反應后的處理步驟。
應用
病毒檢測:快速、準確地檢測病毒DNA或RNA的存在,如HIV、HBV、HCV等。
基因表達分析:測量不同樣本中特定基因的表達水平,研究基因的調控機制和生物過程。
微生物檢測:檢測和定量微生物,如細菌、真菌等。
DNA定量:精確測定DNA的濃度。
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