定義
上轉(zhuǎn)發(fā)光免疫分析儀是一種基于上轉(zhuǎn)換發(fā)光技術(shù)的免疫層析檢測系統(tǒng)的核心設(shè)備。它利用特殊的上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料作為標(biāo)記物,結(jié)合免疫層析技術(shù)(如側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l),通過儀器檢測試紙條上特定位置發(fā)出的光信號,對待測物(如病原體抗原/抗體、生物標(biāo)志物等)進(jìn)行定性和定量分析。
核心技術(shù)與原理
上轉(zhuǎn)換發(fā)光技術(shù):
極低背景干擾: 生物樣本本身在近紅外區(qū)幾乎沒有自發(fā)熒光,因此背景信號極低,顯著提高信噪比。
高靈敏度: 低背景使得檢測限更低,能檢測到更低濃度的目標(biāo)物。
抗干擾能力強(qiáng): 不易受樣本基質(zhì)(如血液、唾液、尿液)中復(fù)雜成分的干擾。
光穩(wěn)定性好: 稀土材料不易發(fā)生光漂白,信號穩(wěn)定。
關(guān)鍵材料: 使用摻雜稀土元素(如鐿Yb3?、鉺Er3?、銩Tm3?等)的納米晶體(常見基質(zhì)如NaYF?)。
獨(dú)特發(fā)光機(jī)制: 與傳統(tǒng)熒光標(biāo)記物(需要高能量短波長光激發(fā),發(fā)出低能量長波長光)相反,上轉(zhuǎn)換發(fā)光材料在低能量的近紅外光激發(fā)下,可以發(fā)出高能量的可見光。這是一種反斯托克斯位移發(fā)光。
優(yōu)勢:
免疫層析原理:
與膠體金試紙條類似,試紙條包含樣品墊、結(jié)合墊(包被有標(biāo)記了UCP納米顆粒的抗體)、硝酸纖維素膜(包被有檢測線T和質(zhì)控線C的抗體或抗原)、吸水墊。
樣本加入樣品墊后,在毛細(xì)作用下向前流動(dòng)。樣本中的目標(biāo)物在結(jié)合墊處與標(biāo)記了UCP的抗體結(jié)合,形成復(fù)合物。
復(fù)合物繼續(xù)向前流動(dòng)至檢測線,被固定在T線的捕獲物質(zhì)(抗體或抗原)捕獲,形成“夾心”或“競爭”復(fù)合物。
質(zhì)控線捕獲過量的標(biāo)記抗體或另一種復(fù)合物,表明層析過程正常完成。
儀器檢測原理:
定性判斷: 根據(jù)T線和C線信號的有無及強(qiáng)度關(guān)系(通常需要C線信號達(dá)標(biāo)),判斷樣本陰陽性。
定量分析: 通過測量T線(有時(shí)結(jié)合C線進(jìn)行歸一化)的發(fā)光強(qiáng)度,與預(yù)先建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對,計(jì)算出樣本中目標(biāo)物的具體濃度。
將完成層析反應(yīng)的試紙條放入儀器的檢測倉。
儀器內(nèi)置特定波長的近紅外激光器(通常是980nm)作為激發(fā)光源,精確照射試紙條上的檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)。
固定在T線和C線上的UCP納米顆粒在激光激發(fā)下,發(fā)出特定波長的可見光(如540nm綠光,?。叮叮埃睿砑t光等,取決于摻雜的稀土離子)。
儀器內(nèi)置高靈敏度的光電探測器(如光電倍增管或雪崩光電二極管)捕獲這些可見光信號。
信號處理系統(tǒng)將光信號轉(zhuǎn)換為電信號,并進(jìn)行分析計(jì)算。
主要組成部件
樣品倉/檢測倉: 用于放置和固定免疫層析試紙條。
激發(fā)光源: 通常為980nm激光二極管,提供激發(fā)上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的光。
光學(xué)系統(tǒng): 包括透鏡、濾光片等,用于聚焦激發(fā)光到試紙條特定區(qū)域,并收集、過濾掉雜散光,僅讓UCP發(fā)出的特征可見光通過到達(dá)探測器。
光電探測器: 高靈敏度檢測器,將光信號轉(zhuǎn)換為電信號。
信號處理與分析單元: 主板、處理器、算法軟件,負(fù)責(zé)信號放大、模數(shù)轉(zhuǎn)換、背景扣除、結(jié)果計(jì)算(定性/定量)、數(shù)據(jù)存儲等。
顯示屏/用戶界面: 顯示操作菜單、檢測進(jìn)度和最終結(jié)果。
數(shù)據(jù)接口:?。眨樱?、藍(lán)牙、Wi-Fi等,用于數(shù)據(jù)傳輸和連接外部設(shè)備(如電腦、LIS系統(tǒng))。
電源: 內(nèi)置電池或外接電源適配器。
主要特點(diǎn)與優(yōu)勢
超高靈敏度: 顯著優(yōu)于傳統(tǒng)膠體金免疫層析,接近甚至媲美大型化學(xué)發(fā)光或電化學(xué)發(fā)光設(shè)備。
高特異性: 低背景和高信噪比降低了假陽性和假陰性的風(fēng)險(xiǎn)。
定量能力: 能提供精確的濃度值,滿足臨床或科研中對定量結(jié)果的需求。
操作簡便快速: 繼承了免疫層析“一步法”操作的優(yōu)點(diǎn),通常10-20分鐘出結(jié)果,對操作人員要求不高。
便攜性與即時(shí)性: 儀器通常設(shè)計(jì)輕巧便攜,適合在實(shí)驗(yàn)室外(如床邊、基層診所、現(xiàn)場、海關(guān)、家庭)進(jìn)行即時(shí)檢測。
抗干擾能力強(qiáng): 對復(fù)雜樣本基質(zhì)(如全血、血清、血漿、唾液、尿液)的耐受性好。
穩(wěn)定性好:?。眨茫屑{米材料光穩(wěn)定性好,試劑儲存期相對較長。
多指標(biāo)聯(lián)檢: 儀器可支持在同一試紙條上檢測多個(gè)指標(biāo)(多聯(lián)檢)。
數(shù)據(jù)化管理: 可存儲結(jié)果、傳輸數(shù)據(jù)、生成報(bào)告,便于追溯和管理。
應(yīng)用領(lǐng)域
傳染病檢測: 細(xì)菌(如結(jié)核分枝桿菌)、病毒(如COVID-19、流感、HIV、HBV、HCV)、寄生蟲(如瘧原蟲)等抗原或抗體的快速、高靈敏檢測。在COVID-19大流行中發(fā)揮了重要作用。
心血管疾病標(biāo)志物: 肌鈣蛋白、肌紅蛋白、BNP/NT-proBNP、D-二聚體等的快速定量檢測。
炎癥標(biāo)志物:?。梅磻?yīng)蛋白、降鈣素原等的檢測。
腫瘤標(biāo)志物: 甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特異性抗原等的篩查和輔助診斷。
優(yōu)生優(yōu)育與激素:?。龋茫牵ㄔ缭校?、性激素等的檢測。
毒品檢測: 嗎啡、冰毒、大麻等的現(xiàn)場快速篩查。
食品安全: 食源性致病菌、毒素(如黃曲霉毒素)、獸藥殘留等的快速檢測。
生物安全與反恐: 生物戰(zhàn)劑(如炭疽、鼠疫)的快速偵檢。
與傳統(tǒng)免疫層析(如膠體金)的區(qū)別
特性 | 上轉(zhuǎn)發(fā)光免疫分析儀 | 傳統(tǒng)膠體金免疫層析 |
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標(biāo)記物 | 上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米顆?!。ǎ眨茫校?/td> | 膠體金顆粒 |
信號類型 | 光信號(近紅外激發(fā)→可見光發(fā)射) | 顏色信號(可見光反射) |
靈敏度 | 極高 | 較低 |
定量能力 | 強(qiáng),可精確定量 | 弱,通常只能半定量或定性 |
背景干擾 | 極低(近紅外激發(fā),生物樣本無自發(fā)熒光) | 較高(易受樣本顏色、雜質(zhì)影響) |
抗干擾性 | 強(qiáng) | 較弱 |
結(jié)果判讀 | 需專用儀器 | 肉眼或簡單讀卡器 |
成本 | 儀器和試劑成本相對較高 | 成本低廉 |
應(yīng)用場景 | 需要高靈敏度、定量結(jié)果的POCT | 快速篩查、定性/半定量POCT |
發(fā)展趨勢
儀器小型化與智能化: 更便攜、操作更智能、連接性更強(qiáng)(物聯(lián)網(wǎng)、云平臺)。
多通道與高通量: 滿足同時(shí)檢測多個(gè)樣本或多個(gè)指標(biāo)的需求。
試劑菜單擴(kuò)展: 開發(fā)更多檢測項(xiàng)目,覆蓋更廣泛的臨床應(yīng)用。
自動(dòng)化集成: 與樣本前處理設(shè)備集成,實(shí)現(xiàn)“樣本進(jìn)-結(jié)果出”。
靈敏度與穩(wěn)定性提升: 研發(fā)新型UCP材料和優(yōu)化標(biāo)記工藝。
降低成本: 推動(dòng)儀器和試劑成本下降,促進(jìn)更廣泛應(yīng)用。
家庭健康監(jiān)測: 探索在慢性病管理、家庭自測等場景的應(yīng)用潛力。
總結(jié)
上轉(zhuǎn)發(fā)光免疫分析儀是免疫層析技術(shù)領(lǐng)域的一項(xiàng)重大突破,它巧妙地結(jié)合了上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的高靈敏、低背景優(yōu)勢與免疫層析的簡便、快速、便攜特點(diǎn)。作為一種強(qiáng)大的POCT工具,它在傳染病防控、心血管疾病診斷、現(xiàn)場篩查、基層醫(yī)療、應(yīng)急響應(yīng)等多個(gè)領(lǐng)域展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用價(jià)值和發(fā)展前景,顯著提升了即時(shí)檢測的能力和水平。
更多信息:
技術(shù)起源: 上轉(zhuǎn)換發(fā)光材料的研究始于20世紀(jì)60年代,但應(yīng)用于生物檢測和免疫層析是近20年來的重要進(jìn)展。
代表性企業(yè)/產(chǎn)品: 國內(nèi)代表企業(yè)如熱景生物、深圳金準(zhǔn)生物、上海奧普生物等都有成熟的上轉(zhuǎn)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑產(chǎn)品線。
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